一、實驗室管理規范

　　人工授精站實驗室是精液檢查、處理、貯存的場所，為了生產出優質的、符合輸精要求的精液，一定把好質量關，保證出站的每一份精液的活力不低于70%。特對實驗室日常工作做如下規定。

1 、實驗室要求整潔、干凈、衛生，每周徹底清潔一次。

2 、非實驗室工作人員在正常情況下不準進入實驗室，采精員也不準進入實驗室。

3 、所有儀器設備應在仔細閱讀說明書后，由專人按操作規程使用和維護保養；特別是石英蒸餾水制造器，使用時更應有人看護，注意人身安全。

4 、各種電器設備應按其要求選擇適應插座，除冰箱、精液保存箱外，一般電器要求人走斷電，干燥箱無人時設定溫度不應高于100℃。

5 、物品器皿的清洗消毒方法：采精器皿和精液稀釋器皿，以及采精手套均采用一次性物品。

6 、稀釋液的配制、精液檢查、稀釋、分裝一定按照人工授精操作規程進行。

7 、采精室與實驗室之間的傳遞口的兩測窗只有在傳遞物品時才能按先后順序開啟使用。

8 、實驗室地板、實驗臺保持干凈清潔。

9 、下班離開實驗室前一定檢查電源、水龍頭、門、窗是否關閉好，確保安全。

二、采精的操作規程（徒手采精法）           

1 、采精員一手帶雙層手套，另一手持37℃保溫杯(內裝一次性采精袋)用于收集精液。

2 、飼養員將待采精的公豬趕至采精欄，用溫水（夏天用自來水）將公豬的下腹部清洗干凈，再用毛巾擦干。

3 、采精員擠出公豬包皮積尿，按摩公豬包皮部，刺激其爬跨假臺畜。

4 、公豬爬跨假臺畜并逐步伸出陰莖，脫去外層手套，將公豬陰莖龜頭導入空拳。               

5 、用手緊握伸出的公豬陰莖螺旋狀龜頭，順勢將陰莖拉出，握緊陰莖龜頭防止其旋轉，公豬即可射精。                  

6 、用三層沙布過濾收集濃份精液于保溫杯內的一次性采精袋內，最初射出的清亮部分，不必接取，一般情況下僅收集濃份精液；但在寒冷天氣，采精時應注意采出精液的保溫，可根據情況適當增大收集體積。

7 、采精過程中，注意周圍環境的安靜，避免影響采精的多余動作，直到公豬射精完畢之前，不可以松開采精的手。

8 、采精員應注意安全，一旦公豬出現攻擊行為，采精員應立刻逃至安全角。

9 、下班之前徹底清洗采精欄。

10 、 采精期間不準毆打公豬，防止公豬出現性抑制。

11 、公豬采精調教：①后備公豬7月齡開始進行采精調教；②每次調教時間不超過15分鐘；③一旦采精獲得成功，分別在第2、3天再采精1次，進行鞏固掌握該技術；④采精調教可采用發情母豬誘導、觀摩有經驗公豬采精、以發情母豬分泌物刺激等方法；⑤調教公豬要有耐心，不打罵公豬；⑥注意公豬和調教人員的安全。

 13 、采精頻率：8-12月齡公豬每周1次；12-18青年公豬每2周采3次；18月齡后每周采2次。所有采精公豬即使精液不使用時，每周也應采精一次，以保持公豬性欲和精液的質量。

三、稀釋液配制操作規程       

1 、為了保證質量，精液站都使用商品精液稀釋劑，并將其保存在5-10℃的冰箱中，注意防水、防潮。

2 、根據當天精液生產計劃，確定精液稀釋液的配制量，從冰箱中取出相應的精液稀釋劑，置于室溫中。

3 、把一次性稀釋液袋套入稀釋容器中，用電子稱準確稱取1000ml或2000ml蒸餾水，置于35℃恒溫水浴槽中加熱。

4 、待蒸餾水加熱到30℃時，將1：1規格使用的精液稀釋劑完全倒入相應的蒸餾水中，必要時可用水沖洗精液稀釋劑袋內壁。

5 、在稀釋容器中放入磁力攪拌子，用磁力攪拌器攪拌30分鐘，以幫助稀釋劑助溶解。   

6 、將配制好的稀釋液放入35℃的恒溫水浴槽中，確保使用前加熱到35℃。

7 、稀釋液應在配制好的1小時后使用，以保證其中的PH值和滲透壓以及其它離子濃度達到穩定；沒有使用完的稀釋液可存放入冰箱4℃保存，不超過48小時，48小時后，應在使用前加入抗生素。 

四、精液品質的檢查操作規程     

 1 、精液量：以電子天平稱量精液，按每克1毫升計。

 2 、顏色：正常的精液是乳白色或淺灰白，精子密度越高，色澤愈濃，其透明度愈低。如帶有綠色或黃色是混有尿液，若帶有淡紅色或紅褐色是含有血液，這樣的精液應舍棄不用。         

 3 、氣味：豬精液略帶腥味，如有異常氣味，應廢棄。

 4 、精子活力檢查：活力是指呈直線運動的精子百分率，在顯微鏡下觀察精子活力，原精一般按0-5分評分；稀釋后的精液一般按0-100%評分，一般要求原精活力在2分以上可以進行稀釋；稀釋后精液活力在70% 以上進行分裝；貯藏精液活力在60%以上使用。

 5 、精子密度：指每毫升精液中所含的精子數，是確定 稀釋倍數 的重要指標。要求用專用精液密度儀測定。輸精濃度過低會造成產仔數降低，濃度過高將影響到精液的保存期縮短。

 6 、精子畸形率：畸形率是指異常精子的百分率，一般要求畸形率不超過20％。畸形精子種類很多,如:巨型精子、短小精子、雙頭或雙尾精子，頂體膨脹或脫落、精子頭部殘缺或與尾部分離、尾部變曲。

 7 、按要求做好精液品質檢查登記表。    

五、精液的稀釋操作規程                    

 1 、精液采集后應盡快在30分鐘在稀釋。

 2 、未經品質檢查或檢查不合格（活力70%以下）的精液不能稀釋。

 3 、稀釋液與精液要求等溫稀釋,兩者溫差不超過1℃，即稀釋液應加熱至33℃-37℃,以精液溫度為標準,來調節稀釋液的溫度，絕不能反過來操作。

 4 、稀釋時，將稀釋液沿盛精液的杯壁緩慢加入到精液中，然后輕輕搖動或用消毒玻璃棒攪拌，使之混合均勻。

 5 、如作高倍稀釋時，應先進行低倍稀釋（1：1-2），稍待片刻后再將余下的稀釋液沿壁緩慢加入。

 6 、稀釋倍數的確定：活率≥0.7的精液，一般按每個輸精劑量含40億個總精子，輸精量為80-90ml確定稀釋倍數，例如: 某頭公豬一次采精量是200ml，活力為0.8，密度為2億/ml，要求每個輸精劑量是含40億精子，輸精量為80ml，則總精子數為200ml×2億/ml=400億，輸精頭份為400億÷40億=10份，加入稀釋液的量為10×80ml-200ml=600ml。

 7 、稀釋后要求靜置片刻，再作精子活力檢查，如果精子活力低于70%，不能進行分裝。

六、精液的常溫保存                    

1 、精液稀釋后，檢查精液活力，若無明顯下降，按每頭份80-90 ml分裝。

2 、在輸精袋上寫清楚公豬的品種、耳號，采精日期。

3 、置于 22℃-25℃ 的室溫 ( 或用幾層毛巾包被好)1小時后（在炎熱的夏季和寒冷的冬季，特別應注意本環節），再直接放置17℃冰箱中。

4 、保存過程中要求每12小時將精液緩慢輕柔的混勻一次，防止精子沉淀而引起死亡。

5 、每天檢查精液保存箱溫度并進行記錄，若出現停電應全面檢查貯存的精液品質。

6 、盡量減少保存精液保存箱關開次數，以免造成對精子的打擊而死亡。 

七、發情鑒定技術的操作規程                    

1 、母豬發情周期平均21天（19--23天），大多數經產母豬一般在仔豬斷奶后的一周內（3--7天），可再次發情排卵，配種受胎。

2 、母豬發情周期可分為發情前期、發情期、發情后期和間情期，母豬只有在發情期才允許公豬爬跨或出現“站立反應”，此行為表現可是母豬適時輸精的指標。

3、各期特征，略述如下：①發情前期：母豬舉動不安，外陰腫脹，并由淡黃色變為紅色這種變化在后備母豬較為明顯；陰道有粘液分泌，其粘度漸漸增加。在此期母豬不允許人騎在背上，平均可有2.7天，不宜輸精配種。②發情期：平均約2.5天，特征為母豬陰部腫脹及紅色開始減退，分泌物也變濃厚，粘度增加。此時母豬允許壓背而不動，壓背時，母豬雙耳豎起向后，后肢緊繃。③發情后期：1-2天,發情母豬的陰部完全回復正常，不允許公豬爬跨。④間情期:13-14天，完全恢復正常狀態。

4 、發情鑒定：每日最少要做兩次 公豬試情 （每天上午6：30-8：30和下午16：00-17：30進行發情檢查），即在安靜的環境下，有公豬在旁時，壓背，以觀察其站立反應。試情公豬一般選用善于交談、唾液分泌旺盛、行動緩慢的老公豬。

5 、作好發情檢查的完整記錄：包括發情母豬耳號、胎次、發情時間、外陰部變化、壓背反應等，尤其是后備母豬的記錄。   

八、 輸精操作規程                   

1 、輸精次數：可根據具體情況采用2次人工授精或3次人工授精。                  

2 、輸精時間：①斷奶后3-6天發情的經產母豬，發情出現站立反應后6-12小時進行第1次輸精配種；②后備母豬和斷奶后7天以上發情的經產母豬，發情出現站立反應，就進行配種（輸精）。                              

 3 、精液檢查：從17℃保存箱取出的精液，輕輕搖勻，滴取1滴（不能太小）置于在35℃恒溫板上的載玻片上預熱片刻后，再蓋上蓋玻片，在400倍高倍鏡下檢查活力，精液活力≥0.7，才可進行輸精。

4 、將待配種母豬趕入 專用配種欄 ，使母豬在輸精時可與隔壁欄的試情公豬鼻部接觸，在母豬處于安靜狀態下輸精。

5 、輸精人員清潔雙手。

6 、用干紙巾清潔母豬外陰。

7 、從密封袋中取出沒受任何污染的一次性輸精管（手不應接觸輸精管前2/3部分），在其前端凹槽涂上潤滑液。

8 、將輸精管45度角向上插入母豬生殖道內，輸精管進入10cm左右之后，感覺到有阻力時，使輸精管水平，繼續緩慢用力插入，直到感覺輸精管前端被鎖定（輕輕回拉不動）。

9 、從精液貯存箱取出品質合格的精液，確認公豬品種、耳號。

10 、 緩慢搖均精液 ，用剪刀剪去精液袋管嘴，接到輸精管上，使精液袋豎直向上保持精液流動暢通，開始進行輸精。

11 、輸精過程中，盡量避免使用用力擠壓的輸精辦法，當輸精困難時，可通過撫摸母豬的乳房或外陰、壓背刺激母豬等方法，使其子宮收縮產生負壓，將精液吸納；如精液仍難以輸入，可能是輸精管插入子宮太靠前，這時需要將輸精管倒拉回一點。

12 、輸精時間最少要求3-5分鐘，輸完一頭母豬后應在防止空氣進入母豬生殖道的情況下，把輸精管后端一小段折起，使其滯留在母豬生殖道內3-5分鐘后，再將輸精管慢慢拉出。

13 、從17℃精液保存箱中取出的精液，無需升溫至37℃，搖勻后可直接輸精。

14 、在寒冷環境中輸精應注意溫度降低。

15 、室外輸精應避免陽光直射精液。

16 、經產母豬用一次性海綿頭輸精管，后備母豬用一次性螺旋頭輸精管。

17 、每頭母豬在一個發情期內要求至少輸精兩次，兩次輸精時間間隔12小時左右。

18 、認真登記母豬生產卡、配種記錄。